血液RNA提取试剂盒
| 【编号】BK2022031705 | 【CAS号】 | ||
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适用于血液、血浆、血清、淋巴液等样品中 RNA 的提取。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，配合本公司独特的裂解液配方可以可最大限度的回收高纯度 RNA。提取的 RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如 RT-PCR、RT-qPCR、体外转录、分子克隆等。
操作方法
一、样本预处理：
取 250 μL 血液（或血清、血浆、脑脊液等液体样本）转移至 1.5 mL 的 RNase-free 离心管中。
【注】：不足 250 μL 时，需用 PBS 或生理盐水补足。
加入 750 μL 裂解液 LB，反复吹打，并剧烈振荡混匀。
室温静置 5 min。
加入 200 μL 氯仿（自备），剧烈振荡 15 sec 混匀。
室温静置 2 min。
4℃ 12,000rpm 离心 10 min，使样品分层。取上层水相转移至 1.5 mL 的 RNase-free 离心管中。
【注】：样品会分为三层，下层为有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 存在于上层水相中。
【注】：上层容量约为所加裂解液 LB 总量的 70%。如加入 750 μL 裂解液 LB，上层水相约为 525 μL。建议吸取 500 μL， 以防吸到中间层造成 DNA 污染。
加入 0.5 倍体积无水乙醇（自备），颠倒混匀。
【注】：出现沉淀属正常现象。
二、RNA 提取：
将 RNA 吸附柱 B3 套入 2 mL 收集管中，备用。
将上述的预处理混合液加入到 RNA 吸附柱 B3 中，12,000 rpm 离心 1 min，弃掉废液。
加入 500 μL 去蛋白液 PL，12,000 rpm 离心 30 sec，弃废液。
将 RNA 吸附柱 B3 放回收集管，加入 500 μL 漂洗液 W*，12,000 rpm 室温离心 30 sec，弃废液。
【注】：确保漂洗液 W*已添加无水乙醇。
重复一遍步骤 4。
将 RNA 吸附柱 B3 放回收集管，空柱 12,000 rpm 室温离心 2 min，以除去残留的漂洗液 W*。
将 RNA 吸附柱 B3 放入新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，在 RNA 吸附柱 B3 中央加入 30-50 μL RNase-free H2O，室温放置 2 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min。收集滤液，即为 RNA 溶液。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热 RNase-free H2O；②将 RNA 滤液再次上柱，室温放置 2 min 后，洗脱。
RNA 溶液可置于-80℃长期保存。
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