重组蛋白L琼脂糖凝胶FF中压预装柱
| 【编号】BK-NRPB52S | 【CAS号】CAS | ||
| 【货号】BK-NRPB52S-Y25 | 【规格】 | ||
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品 名：重组蛋白L琼脂糖凝胶FF
英文名：Recombinant Protein L NUPharose Fast Flow, rProtein L NUPharose FF
规 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格订制
运 输：2 ~ 25℃，常压、避光
贮 存：20%乙醇，2-8℃
保质期：3年
相关介绍：
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF是将重组大消化链球菌蛋白L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，简称r-PPL）偶联在高度交联的琼脂糖凝胶上的一种亲和纯化介质。大消化链球菌蛋白L（PPL）能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点，这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链（人类1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链（2型）结合，所以重组蛋白L琼脂糖凝胶FF不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。
技术指标：
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基质 |
4%高度交联琼脂糖凝胶 |
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配基 |
重组蛋白L |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒径 |
60~180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推荐流速 |
20-100 cm/h |
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工作（清洗）pH值 |
2~9(2~10) |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
≥40 mg/ml human IgG |
抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：
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种类 Species |
亚型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
蛋白L Protein L |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
+++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
+++ +++ +++ +++ +++ |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
+++ +++ +++ +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
- - |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
- - |
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马 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
NA NA NA |
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兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
+ |
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猪Pig |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
NA |
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鸡Chicken |
IgY |
- |
- |
- |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合；NA表示暂无数据。能用于亲和纯化的抗体一般需要中等以上的结合力。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸盐缓冲液（PB），pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH 2.7
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱，用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；
3)将3 ml小鼠腹水用结合缓冲液稀释至15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积至基线；
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6)每次使用后再用3~5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗；
7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的小鼠单抗纯度在95%以上。
注意事项：
1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5%~20%、pH 7-9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
4)通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH 2.0~2.7）洗3~5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。
5)使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个柱体积（10~30min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4~16h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上；或10mM NaOH洗1-3个柱体积（10-20min），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。
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