蛋白A/G琼脂糖凝胶FF中压预装柱
| 【编号】BK-NRPB13S | 【CAS号】CAS | ||
| 【货号】BK-NRPB13S-Y25 | 【规格】 | ||
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品 名：蛋白A/G琼脂糖凝胶FF
英文名：Protein A/G NUPharose Fast Flow, Protein AG NUPharose FF
规 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格定制
运 输：2 ~ 25℃，常压、避光
贮 存：20%乙醇，2 ~ 8℃
保质期：3年
相关介绍：
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白（r-PAG，NRPA14S）键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。与单独的蛋白A或蛋白G分离介质相比，具有更宽广的结合范围，可以与人的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合，但不能与小鼠的IgA、IgM和血清白蛋白结合，适合用于鼠IgG单抗的提取和检测。同时融合后的r-PAG降低对pH的依赖，允许在pH5 ~ 8进行结合。
技术指标：
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基质 |
4%交联琼脂糖凝胶微球 |
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配基 |
蛋白A蛋白G融合蛋白 |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒径 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推荐流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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pH稳定性 |
pH 3 ~ 9，pH2 ~ 10（清洗） |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
≥ 20 mg/ml IgG |
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保存条件 |
2 ~ 8℃保存于20%乙醇溶液中 |
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M Glycine-HCl缓冲液，pH 2.5
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
3)将3 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6)目的抗体洗脱后用结合缓冲液清洗5 ~ 10个柱体积平衡柱子；
7)分析洗脱下来的兔多抗。
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种类 Species |
亚型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
蛋白A蛋白G融合蛋白 Protein AG |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
+++ +++ +++ +++ + - + + |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
++ +++ + +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
+++ +++ |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
+++ +++ |
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马 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
+ + +++ |
|
兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
+++ |
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猪Pig |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
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鸡Chicken |
IgY |
- |
- |
- |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。
注意事项：
1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务；
2)样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 10%、pH 7.5的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活；
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子；
4)多次使用后会有沉淀蛋白，强疏水性蛋白，脂蛋白，脂质体等非特异吸附凝胶上，可以用0.1 %去垢剂短时间清洗，如0.1% Triton X-100清洗2个柱体积，立即用结合缓冲液洗5 ~ 10个柱体积。也可以用70%乙醇清洗作同样清洗。
5)
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推荐流速 |
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预装柱体积（ml） |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml /min ) |
0.2 |
1 |
2 |
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