水凝胶纳米医学生物纳米材料北科纳米纳米递送系统纳米酶纳米微球

Ni-TED琼脂糖凝胶FF重力预装柱

【编号】BK-NRPB58S

【CAS号】CAS

【货号】BK-NRPB58S-Z25

【规格】

5分钟轻松选对产品方案

18915413828 / 17768014569 / 18915413828 / 17761925168

价格：登录查看

数量：

品名：Ni-TED琼脂糖凝胶FF

英文名：Nickel Tris(carboxymethyl)ethylenediamine NUPharose Fast Flow, Ni-TED NUPharose FF

规格：20 ml，100 ml，1L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格订制

运输：2 ~ 30℃，常压、避光

贮存：20%乙醇，2 ~ 25℃

保质期：5年

相关介绍：

Ni-TED琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联三羧甲基乙二胺（TED），再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸（IDA）相比，Ni-TED琼脂糖凝胶FF具有很好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性，如样品中含有10-100mM EDTA或10-100mM β-巯基乙醇或5-20mM DTT，均可正常纯化；无需脱镍，也可以用1M NaOH再生清洗。

Ni-TED琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了His-Tag重组蛋白的Ni-TED琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。

技术指标：

基质	6%琼脂糖凝胶
配基	-N(CH₂COOH)CH₂CH₂N(CH₂COOH)₂
配基密度	≥30 μmol/ml
填料粒径	60~180 μm
最大流速	800 cm/h
推荐流速	50-100 cm/h
pH稳定性	pH 3-12（清洗pH 2-14）
耐反压	0.3 MPa
载量	≥20 mg His-tag重组蛋白/ml

使用方法：

1、色谱柱装填

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。

（3）将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。

（4）柱压不超过0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则正常流速下填装。

（5）填装好的Ni-TED琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡，建议流速100cm/h，平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化。

2、上样

（1）缓冲液选择：一般选用pH6-8的结合缓冲液，常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除离子交换作用。在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF，推荐使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH调节pH 7.4）作为结合缓冲液。

（2）样品处理：样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致，可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液（常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等）、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

3、洗脱

（1）Ni-TED琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。

（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH。

（3）在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF，不知道洗脱的咪唑浓度，建议在结合缓冲液中分别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑，浓度从低到高，分别洗脱和收集，通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。

（4）有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱，确定较佳洗脱条件。

4、在位清洗

使用完的层析柱出现堵塞、压力增大、流速减慢、载量下降等情况时，就需要进行在位清洗。Ni-TED琼脂糖凝胶FF的优势为无需脱镍即可用1M NaOH再生清洗，所以清洗最常用的方法：使用完的层析柱用蒸馏水清洗3-5个柱体积，然后用1M NaOH清洗3-5个柱体积（保持时间0.5-1h），然后用蒸馏水清洗至中性即可。同其它层析介质一样，为了达到更好的清洗目的，可以采用反向清洗；如需去除热源，可在1M NaOH中保持更长时间（1-2h）。

除了NaOH清洗外，强电荷蛋白可以用1-2M NaCl进行清洗；脂类、脂蛋白、强疏水蛋白可以用30%异丙醇（或70%乙醇）进行清洗。