重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF重力预装柱
| 【编号】BK-NRPB06S | 【CAS号】CAS | ||
| 【货号】BK-NRPB06S-Z25 | 【规格】 | ||
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品 名：耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF
英文名：Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF
规 格：20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，特殊规格订制
运 输：2 ~ 25℃，常压、避光
贮 存：20%乙醇，2 ~ 8℃
保质期：3年
相关介绍：
耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF与普通的蛋白A琼脂糖凝胶相比，主要提高了凝胶的耐碱性，可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除热源。在骨架与重组耐碱蛋白A键合上分别设计了延伸碳臂和定向结合位点，保证了重组耐碱蛋白A与骨架的定向牢固键合，以及与抗体的高效亲和。
技术指标：
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基质 |
4%高度交联琼脂糖凝胶 |
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配基 |
重组耐碱蛋白A |
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配基密度 |
≥6 mg/ml |
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填料粒径 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推荐流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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工作（清洗）pH值 |
3 ~ 11(2 ~ 13) |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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载量 |
≥40 mg/ml IgG |
产品特点：
1）配基脱落：约1~7 ng rat-PA/mg IgG，配套的rat-PA试剂盒（NRPB53S）检测多次使用的洗脱液中残留rat-PA含量
2）耐碱性
在25℃的条件下，将rat-PA浸在不同浓度的NaOH溶液中：
0.1 M 处理72 h载量维持在90%以上；
0.5 M处理16 h在80%以上，处理36 h在50%以上；
1.0 M处理4 h在90%以上，处理8 h在50%以上。
3）耐酸性
在25℃的条件下，将rat-PA浸在不同pH的酸溶液中：
pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 处理6天载量均维持在90%以上
0.5 M HCl处理2天载量在80%以上，处理6天在50%以上
4）耐压性
仪器：AKTA explorer 100
柱子：1.0 cm×30 cm
流速：每30 s增加0.5 ml/min
5）使用寿命
200次循环纯化牛血清中IgG，每次使用0.1 M NaOH处理15 min，200次使用后未发现明显的载量损失。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液再生清洗；
7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
图 1
注意事项：
1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
4)使用后应进行在位清洗，一般建议用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
5)更高要求（消毒、去内毒素、超牢固蛋白残留等）的在位清洗，可以先用含还原剂（如100 mM DTT、β-ME或1-巯基甘油）的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积，再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5个柱体积（10 ~ 30 min），然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
6)虽然本产品具有较好的碱耐受性，但长期使用较高的NaOH浓度（如0.5 mol/L）清洗仍会缩短使用寿命，建议每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次，每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。
7)为了更好的保护填料，应避免强烈的pH变化，建议酸性洗脱目的抗体后，用平衡缓冲液恢复至中性，再进行NaOH清洗。
8)本产品具有极低的配基脱落率（＜10 ng/mg IgG），结合耐碱特性，特别适用于单克隆抗体的生产。但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高，建议长期储存后的首次使用，先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积，再用平衡缓冲液平衡和样品纯化。
推荐流速
预装柱体积 1 ml 5 ml 10 ml
流速(ml /min ) 0.2 1 2
9)
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推荐流速 |
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预装柱体积 |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml /min ) |
0.2 |
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2 |
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