NHS-琼脂糖凝胶FF
| 【编号】BK-NRPB11L | 【CAS号】CAS | ||
| 【货号】BK-NRPB11L-500 | 【规格】 | ||
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品 名：NHS-琼脂糖凝胶FF
英文名：NHS Activated NUPharose Fast Flow, NHS NUPharose FF
目录号：NRPB11L
规 格：1ml，10 ml，100 ml，1L，特殊规格订制
运 输：2 ~ 25℃，常压、避光
贮 存：100%异丙醇，-20℃
保质期：1年
相关介绍：
NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高，非特异性吸附少，流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和的与氨基基团反应，特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶、核酸等功能性生物大分子。
技术指标：
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外观 |
乳白色半透明凝胶状凝胶 |
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基质 |
4%琼脂糖凝胶 |
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配体 |
NHS |
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配体密度 |
≥15 μmol/mL |
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蛋白质载量 |
≥10 mg/ml IgG |
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耐反压 |
0.3 MPa |
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粒径范围 |
60 ~ 180μm |
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工作温度 |
4 ~ 40℃ |
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基质pH稳定性 |
3 ~ 12（长时间）；2 ~ 14（短时间） |
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基质化学稳定性 |
在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液；1 mol/L NaOH；1 mol/L乙酸（pH 4.0）；6 mol/L盐酸胍；70%乙醇。 |
应用实例：
实验名称：NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体。
实验步骤：
1. 配制抗体：取100 mg IgG加10 ml 偶联缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解，留0.1 ml以便测定偶联效率。
2. 偶联反应：取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF，用50 ml 1 mM HCl分三次清洗去除保存液，清洗后立即加入抗体偶联溶液中，4℃，震荡反应6 小时或者过夜，进行偶联反应。
3. 封闭：滤出反应液，用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶，然后用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3)，室温震荡4 小时（或者过夜）封闭未偶联的基团，封闭后用20 ml蒸馏水洗干净即可。
4. 检测：偶联前后的反应液用SDS-PAGE检测对比偶联效率，偶联好的填料根据配基特性测定功能和载量。
注意事项：
1. 如果配基的稳定性不了解，可以选择不同pH的缓冲液和温度，用配基相应浓度的溶液0.5 ~ 1 ml，不加填料模拟偶联条件，观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生对应的偶联效果就不好，可以稍微降低pH或温度，同时可以加5%左右的甘油或PEG保护蛋白，避免产生沉淀，总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。
2. 如果偶联的配基不稳定，可在摇床上4℃振摇偶联1 ~ 12小时，以维持配基的活性。偶联配基后尽快清洗填料，避免在高pH 条件中，配基失活。
3. 更稳定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氢钠，可适当提高温度，如室温，偶联时间则相应可缩短至1 ~ 2 小时。
4. 偶联蛋白的较适pH为7.5 ~ 9.0，在室温或4℃均可，提高温度能增加配基的偶联效率，根据蛋白的稳定性选择合适的pH 和温度。偶联蛋白溶液的浓度以5 ~ 15 mg/ml较佳。凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5 ~ 1:2.0较佳。
5. 偶联的缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用氨基的缓冲体系，如Tris-HCl缓冲液。
6. 封闭的缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂，如乙醇胺、Tris等，pH在8 ~ 9室温封闭数小时可完全封闭。推荐的封闭缓冲液为0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCl，pH 8.3或0.1 M Tris-HCl，pH 8.5。
7. 在偶联中尽量使用温和的混匀方式，如震荡、翻转、旋转等。如使用磁力搅拌器或者机械搅拌，需要降低搅拌的速度，只要把填料能混匀完全悬浮起来即可，避免剧烈搅拌使凝胶微球破碎。
8. NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用，避免时间过长造成活性降低。
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